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  • 下載文件詳細資料
      文件名稱: 菊粉(Inulin)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
      公司名稱: 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
      下載次數: 871
      文件詳細說明:
     

    菊粉(Inulin)酶聯免疫分析(ELISA)

    試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

    使用目的:

    本試劑盒用于肉類組織,血清和尿樣中菊粉(Inulin)殘留的定量檢測。

    2 實驗原理

    本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有菊粉(Inulin偶聯抗原,加入菊粉(Inulin標準品或樣品,游離菊粉(Inulin與微孔條上預包被的菊粉(Inulin偶聯抗原互相競爭抗菊粉(Inulin抗體酶標記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變為黃色,用酶標儀在450nm波長下進行檢測,吸光值與樣品中菊粉(Inulin含量成反比,通過標準曲線計算樣品中菊粉(Inulin的含量。  

    3 試劑盒組成 

    3.1 預包被的菊粉(Inulin偶聯抗原的可拆酶標板:1塊(12×8條)。
    3.2菊粉(Inulin標準品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是: ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。
    3.3菊粉(Inulin抗體酶結合物:1瓶(6ml)。
    3.4顯色液A1瓶(6ml)。
    3.5顯色液B1瓶(6ml)。
    3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
    3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,  6ml),用于樣品稀釋用。
    3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
    3.9說明書一份。


    4 需要而未提供的材料
    4.1 設備
    4.1.1波長450nm酶標儀。 
    4.1.2粉碎機。
    4.1.3量筒。
    4.1.4振蕩器。
    4.1.5漏斗。
    4.1.6Whatman No 1或相當的濾紙。
    4.1.7微量移液器。
    4.2 試劑
    4.2.1去離子水或蒸餾水。
    4.2.2 甲醇。
    貯存
    5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍
    5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
    注意事項
    6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
    6.2 不要使用過期試劑盒。
    6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。
    6.4 標準品中含有菊粉(Inulin),使用時應特別注意,操作時應帶手套。
    6.5 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
    6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果。
    6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結果。
    6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果
    6.9 混合試劑時應避免起泡。
    工作液準備
    7.1 菊粉(Inulin)標準品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
    7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

    7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
    7.3 顯色劑:已備用,避免光線直照
    7.4 反應終止液:已備用
    樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
    8.110g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
    8.2強力振蕩3分鐘
    8.3Whatman No 1濾紙過濾
    8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2
    酶免分析步驟
    9.1 實驗須知
    9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?/span>25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
    注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。
    9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
    9.1.3 請不要改變分析程序
    9.1.4 請使用精確的微量移液器
    9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序
    9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作
    9.1.7 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
    9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
    9.2 分析步驟
    9.2.1 預先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測
    9.2.2 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
    9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
    9.2.4 B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液
    9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
    9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
    9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗菊粉(Inulin)抗體酶結合物
    9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。 
    9.3 37溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)
    9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
    9.4 反應
    9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯色液B;輕微晃動反應板使之徹底混勻
    9.4.2 37溫浴10min
    9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻
    9.4.4 450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。
    10 結果計算
    10.1定量分析
    10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
    B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
    B0—0μg/L標準溶液的平均吸光度值
    10.1.2以菊粉(Inulin)濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為菊粉(Inulin)濃度的對數值,求得反對數即為測定液中菊粉(Inulin)濃度Cppb)
    10.1.3由于樣品經過了預先稀釋,因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。 
    10.2 半定量測定
    10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
    10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。


    11 特異性
    物質 交叉反應
    菊粉(Inulin) 100%
    12 試劑盒參數
    本試劑盒檢測下限為0.05ppb
    B0吸光度最佳值應大于1.0
    試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。
    用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。
    13 
    試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。
    14 分析限制
    本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。


     

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