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      文件名稱: 人腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
      公司名稱: 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
      下載次數: 853
      文件詳細說明:
     

    人腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

    檢測范圍:                                                          96T

    0.5ng/mL -12ng/mL

     

    使用目的:

    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)水平。用純化的人腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP),再與HRP標記的腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腸型脂肪酸結合蛋白(iFABP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人腸型肪酸結合蛋白(iFABP)濃度。 

    試劑盒組成 

    1

    30倍濃縮洗滌液

    20ml×1

    7

    終止液

    6ml×1

    2

    酶標試劑

    6ml×1

    8

    標準品(24ng/mL

    0.5ml×1

    3

    標包被

    12孔×8

    9

    標準品稀釋液

    1.5ml×1

    4

    樣品稀釋液

    6ml×1

    10

    說明書

    1

    5

    顯色劑A

    6ml×1

    11

    封板膜

    2張  

    6

    顯色劑B

    6ml×1/

    12

    密封袋

    1

    標本要求 

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    12ng/mL

    5號標準品

    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

    6ng/mL

    4號標準品

    150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

    3ng/mL

    3號標準品

    150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

    1.5ng/mL

    2號標準品

    150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

    0.75ng/mL

    1號標準品

    150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

     

     

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

    4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

    7. 溫育:操作同3。

    8. 洗滌:操作同5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    操作程序總結:

     

     

    計算

      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 

    注意事項

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    保存條件及有效期

    1試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

     

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